花生粕、豆類粕 凱氏定氮測定粗蛋白方法

農作物在人類生活中*的一部分，為人類飲食健康提供很大的幫助，特點是花生與豆類為人類提供大量能量需求，下面為用凱氏定氮儀測定花生粕和豆類粕粗蛋白含案例提供分享。

免水凱氏定氮儀

用于測定有機物的含氮量,若蛋白質的含氮量已知時，則可用此法測定樣品中蛋白質的含量。當蛋白質與濃硫酸共熱時，其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水，而氮則轉變成氨，并進一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為“消化”。但是，這個反應進行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應液的沸點，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進反應的進行。

消化完成后，在凱氏定氮儀中加入濃堿，可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，借助水蒸汽蒸餾法，將產生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨與溶液中氫離子結合，使溶液中的氫離子濃度降低，指示劑顏色改變，然后用標準無機鹽酸滴定，直至恢復溶液中原來的氫離子濃度為止。根據所用標準鹽酸的量可計算出待測物中的總氮量。蛋白質的含氮量為16%，即1克蛋白質中的氮相當于6.25克蛋白質，用凱氏定氮法測出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質的含量。

1 實驗材料

1.1 器材

凱氏定氮儀 、石墨消解儀、300ml凱氏燒瓶 4個； 移液管；錐形瓶； 試管； 小玻璃珠

1.2 試劑

98%濃硫酸分析純；

35％氫氧化鈉溶液；

2％硼酸溶液；

標準鹽酸溶液(0.01mol／L)。 

粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物：K2SO4與CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。

混合指示劑(田氏指示劑)：由50ml 0.1％甲烯藍乙醇溶液與200ml 0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶中備用。

樣品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。

2 實驗步驟

消化：

取4個300ml凱氏燒瓶并標號,各加1顆玻璃珠，在1號及2號瓶中各加樣品1ml，催化劑(K2SO4-CuSO4·5H2O)200 mg，濃硫酸5 ml。注意加樣品時應直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號及4號瓶中各加1ml蒸餾水和與1、2號瓶相同量的催化劑和濃硫酸，作為對照。在通風櫥內進行消化。在消化開始時應控制火力，不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開始分解并放出SO2白煙后，適當加強火力，繼續消化，直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力，冷卻至室溫。

蒸餾器的洗滌：

用水洗滌干凈微量凱氏定氮儀，在蒸汽發生器中加入用幾滴硫酸酸化的蒸餾水和幾滴甲基紅指示劑，用這樣的水蒸氣洗滌凱氏定氮儀。約15分鐘后，在冷凝器下端傾斜放好裝有硼酸-指示劑的錐形瓶，繼續蒸汽洗滌2分鐘，觀察錐形瓶內的溶液是否變色，如不變色則證明蒸餾裝置內部已洗滌干凈。移走錐形瓶，停止加熱，打開夾子。

蒸餾：

設定取30％的氫氧化鈉溶液10ml，向玻璃杯中加入蒸餾水約5ml稀釋液，設定蒸餾時間5分鐘，開始蒸餾。氨氣進入錐形瓶，瓶中的酸溶液由紫色變成綠色。再繼續下一個蒸餾操作。待樣品和對照均蒸餾完畢后，同時進行滴定。

滴定：

用0.01mol／L的標準鹽酸溶液滴定各錐形瓶中收集的氨量，硼酸指示劑溶液由綠色變淡紫色為滴定終點。 

3 結果計算

其中： A為滴定樣品用去的鹽酸溶液平均ml數； B為滴定對照液用去的鹽酸溶液平均ml數； C為所取樣品溶液的ml數。

針對凱式定氮儀有相關案例如果你的實驗室剛需要可以與我們一塊討論、分享，關注格丹納還可以了解以下幾種方法哦。

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